Предыдущая страница реферата | 1  2  3  4  5  6  7 | Следующая страница реферата

Ca2+ . Как видно из рисунка 9 вторая аппликация АТФ вызывала Ca2+ транзиент меньшей (на 30% ( 4%) амплитуды по сравнению с первой

(контрольной) аппликацией. Последующие аппликации АТФ разделенные 60 ти секундным интервалом не вызывали заметного уменьшения амплитуды

[Ca2+]i транзинета по сравнению со второй аппликацией в стандартном растворе
[pic]

В бескальциевом растворе - наоборот, вторая аппликация АТФ вызывала значительное уменьшение Ca2+ транзиента на 40% ( 5% от контроля.

Последующие аппликации АТФ в бескальциевом растворе приводили к последовательному уменьшению амплитуды [Ca2+]i транзиента и после двух - трех последовательных аппликаций сигнал исчезал вообще

(рисунок 10). Такое уменьшение вероятно обусловлено истощением внутриклеточных депо.
[pic]

1. Ингибирование захвата Ca2+ эндоплазматическим ретикулом тапсигаргином

(спецефическим блокатором Ca2+ насоса эндоплазматического ретикулума) уменьшало [Ca2+]i транзиенты, вызванные приложением АТФ, на 63% ( 5% для концентрации АТФ 100 мкМ АТФ (рис. 11). Как видно из рисунка 11 приложение тапсигаргина не влияло на базальный уровень Ca2+ в клетке.

1. Приложение кадмия в концентрации 50 мкМ, верапамила в концентрации

100 мкМ и 50 мкМ никеля обратимо уменьшало амплитуду [Ca2+]i транзиента вызванного приложением 100 мкМ АТФ на 35%, 20%, и 15% сответственно. Данные представлены на рисунке 12.
[pic]

1. Приложение различных агонистов пуринорецепторов вызывало различные по амплитуде ответы. Порядок относительной активности лигандов для данного объекта был следующим ATP(S ( ATФ ( AДФ (( (,(-methylene ATP

( AMФ ( УТФ(( аденозин (ADO), данные преставлены на рисунке 13.
[pic]

1. Сурамин, известный антагонист Р2 типа пуринорецепторов, уменьшал

[Ca2+]i транзиенты, вызванные приложением 100 мкМ АТФ на 76% ( 7% и также не изменял концентрацию [Ca2+]i в покое. Данные представлены на рисунке 14.
[pic]

ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании средних слоев неокортекса крыс мы обнаружили их способность отвечать на приложение АТФ. Таким образом мы можем сделать вывод о наличии в данном объекте пуринорецепторов. Ответ на АТФ является доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в 220 нМ. Последовательные приложения АТФ, после второго приложения, не вызывали уменьшения амплитуды
[Ca2+]in транзиентов. Из этого можно сделать вывод об отсутствии десенситизации данного типа рецепторов.

Исследуя источники повышения цитозольного кальция мы обнаружили, что
АТФ активирует как ионотропные так и метаботропные рецепторы. Блокаторы потенциал - управляемых кальциевых каналов такие как кадмий, никель и верапамил уменьшали АТФ - индуцированные кальциевые транзиенты на 35% -
15%, что говорит об опосредованном АТФ активировании потенциал - управляемых каналов.

Для исследования активацию метаботропных рецепторов. Для этого мы прилагали АТФ в бескальциевом растворе, - амплитуда ответа при этом уменьшалась на 45% ( 7%. Этот результат говорит о том, что внутриклеточные депо принимают участие в генерации [Ca2+]in ответов, причем их вклад близок к половине. При повторных аппликациях АТФ в бескальциевом растворе Ca2+ ответ исчезал полностью после второй аппликации, т.е. внутриклеточные депо полностью истощаются. Исследуя путь высвобождения внутриклеточного кальция мы апплицировали тапсигаргин - спецефический блокатор АТФ - азы эндоплазматического ретикулума. [Ca2+]in транзиенты уменьшались на 63% ( 5% в присутствии тапсигаргина. Аппликация коффеина, агониста рианодиновых рецепторов, в клетках моторной коры 14 дневных крыс не вызывали повышения уровня [Ca2+]in . Следовательно выброс [Ca2+]in из внутриклеточного депо происходит по IP3 - чувствительному механизму.

В дальнейшем мы исследовали более подробно типы присутствующих пуринорецепторов. Построив ряд активности агонистов для Р1 и Р2 пуринорецепторов по амплитудам ответов, мы сделали заключение базирующееся на отсутствии ответа на аденозин, что в нашем объекте присутствуют только
Р2 пуринорецепторы. Проводя дальнейшую субклассификацию Р2 типа рецепторов мы использовали сурамин - блокатор некоторых типов Р2х и Р2у рецепторов.
Приложение сурамина уменьшало амплитуду [Ca2+]i транзинета вызванного приложением 100 мкМ АТФ на 76% ( 5%, что говорит о наличии этих типов рецепторов в исследуемом объекте.

ВЫВОДЫ

1. Приложение АТФ в различных концентрациях вызывает Ca2+ транзиенты в клетках моторной коры крыс.
2. Ответ на АТФ является доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в
220 нМ.
3. АТФ активирует как ионотропный так и метаботропные пути повышения внутриклеточного кальция.
4. В генерации АТФ индуцированного повышения [Ca2+]in принимают участие некоторые типы потенциал - управляемых кальциевых каналов.
5. Высвобождение внутриклеточного кальция происходит из IP3 чувствительных депо.
6. В данном объекте присутсвуют только Р2 подтипы пуринорецепторов.
7. Сурамин - антагонист Р2Х2 и Р2Х5 и Р2У рецепторов уменьшает амплитуду
[Ca2+]in транзиенты, что говорит присутствии некоторых из вышеперечисленных рецепторов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. A.Shmigol, A.Verkhratsky & G. Isenberg (1995): Calcium-induced calcium release in rat sensory neurones. Journal of Physiology

(London), 489.3 627-636.
2. A.Shmigol, G. Isenberg, P.Kostyuk & A. Verkhratsky (1994): Calcium- induced Ca2+ release from internal stores in rat dorsal root ganglion neurones. In: European Journal of Neuroscience, Suppl. 7,

Proceedings of the 16th Annual ENA Meeting, p. 146.
3. A.Shmigol, N.Svichar, P.Kostyuk & A.Verkharatsky. (1995):

Рекомендуем скачать другие рефераты по теме: преступление реферат, сочинение почему.





Предыдущая страница реферата | 1  2  3  4  5  6  7 | Следующая страница реферата