Энергетические вещества тканей почки

| Категория реферата: Рефераты по биологии
| Теги реферата: доклад по информатике, реферат по русскому
| Добавил(а) на сайт: Jadryshnikov.

Определённый интерес представляет также исследование изоферментов аланинаминопептидазы (ААП). Известны 5 изоферментов ААП. В отличие от изоферментов ЛГД изоферменты ААП определяются в различных органах не в виде полного спектра (5 изоферментов), а чаще как один изофермент. Так, изофермент ААП1 представлен главным образом в ткани печени, ААП2 – в поджелудочной железе, ААП3 – в почках, ААП4 и ААП5 – в различных отделах стенки кишки. При повреждении ткани почек изофермент ААП3 обнаруживается в крови и моче, что является специфическим признаком поражения почечной ткани.

Через фильтрующую мембрану клубочка практически не проходят альбумины и глобулины, но свободно фильтруются пептиды. Тем самым в канальцы непрестанно поступают гормоны, изменённые белки. Их расщепление имеет двоякое физиологическое значение – организм освобождается от физиологически активных веществ, что улучшает точность регуляции, а в кровь возвращаются аминокислоты, используемые для последующих синтезов. Имеющиеся данные указывают на возможность извлечения некоторых белков и полипептидов клетками нефрона из околоканальцевой жидкости и их последующего разрушения.

Таким образом, почка играет важную роль в расщеплении низкомолекулярных и изменённых (в том числе денатурированных) белков. Это объясняет значение почки в восстановлении фонда аминокислот для клеток органов и тканей, в быстром устранении из крови физиологически активных веществ и сохранении для организма их компонентов.

Почка не только потребляет глюкозу в процессе обмена, но и обладает способностью к значительной её продукции. В обычных условиях скорости двух последних процессов равны. Использование глюкозы для выработки энергии в почке составляет около 13% общего потребления кислорода почкой.
Глюконеогенез происходит в коре почки, а наибольшая активность гликолиза характерна для мозгового вещества почки.

Почка обладает весьма активной системой образования глюкозы, её интенсивность на 1 г массы почки больше, чем в печени. При длительном голодании в почках образуется половина общего количества глюкозы, поступающей в кровь. Для этого используются органические кислоты, которые превращаются в глюкозу, являющуюся нейтральным веществом, что способствует одновременно регуляции pH крови. При алкалозе, напротив, снижен уровень глюконеогенеза из кислых субстратов. Зависимость скорости и характера глюконеогенеза от велечины pH является особенностью углеводного обмена почки по сравнению с печенью.

Превращение различных субстратов в глюкозу, поступающую в общий кровоток и доступную для утилизации в различных органах и тканях, свидетельствует о том, что почки присуща важная функция, связанная с участием в энергетическом балансе организма.

Почка оказалась основным органом окислительного катаболизма инозитола.
В ней миоинозитол окисляется в ксилулозу и затем через ряд стадий в глюкозу. В тканях почки синтезируется фосфатидилинозитол, являющийся необходимым компонентом плазматических мембран. Синтез глюкуроновой кислоты имеет большое значение для образования гликозаминогликанов, содержание которых высоко в межклеточной ткани внутреннего мозгового вещества почки и столь существенно для процесса осмотического разведения и концентрирования мочи.

Участие в обмене липидов связано с тем, что свободные жирные кислоты извлекаются почкой из крови и их окисление обеспечивает в значительной степени работу почки. Так как свободные жирные кислоты связаны в плазме с альбумином, то они не фильтруются, а их поступление в клетки нефрона происходит со стороны межклеточной жидкости. Эти соединения окисляются в большей степени в коре почки, чем в её мозговом веществе. В почке образуются триацилглицерины. Свободные жирные кислоты быстро включаются в фосфолипиды почки, играющие важную роль в выполнении различных транспортных процессов. Роль почки в липидном обмене состоит в том, что в её ткани свободные жирные кислоты включаются в состав триацилглицеринов и фосфолипидов и в виде этих соединений поступают в циркуляцию.

2.Экспериментальная часть.

2.1. Методы и материал исследования.

Исследования тканей почки проводились на половозрелых 7 месячных белых крысах генетической линии Вистар женского пола(2шт.) и мужского (1 шт.)
(табл.1).

Табл.1 Материал исследования
|№ п/п |Масса животного, г |Масса почки, г |
|1 |234,0 (9,8 |1,05(0,08 |
|2 |249,7(9,8 |0,76(0,08 |
|3 |214,9(9,8 |0,70(0,08 |
|Среднее значение |232,9 |0,84 |

Метод 1. Определение глюкозы.

Глюкоза определялась редуктометрическим феррицианидным методом. Принцип метода состоит в следующем: белки ткани осаждаются гидроксидом кадмия.
Глюкоза, содержащаяся в безбелковом фильтрате, окисляется в щелочной среде феррицианидом калия (красная кровяная соль), избыток которого определяется иодометрически. Образовавшийся ферроцианид калия связывается сернокислым цинком, который входит в состав “тройного раствора”[6].

Метод 2. Определение гликогена.

Стадия 1. Выделение гликогена. Принцип метода заключается в следующем: ткань подвергается десмолизу в 30%-м гидроксиде калия (заменять на гидроксид натрия нельзя, так как при этом образуются плохо растворимые в спирте натриевые мыла и сода – это затрудняет последующую очистку осадка гликогена). Из десмолизата гликоген осаждается спиртом.

Стадия 2. Осаждённый гликоген подвергается гидролизу, и образовавшаяся глюкоза определяется редуктометрическим феррицианидным методом (метод 1)
[6].

Метод 3. Совместное определение пирувата и лактата.

Стадия 1. Построение калибровочного графика для определения пирувата.
Составляется ряд стандартных растворов пирувата (включая контроль – С=0).
Строится график зависимости оптической плотности растворов от концентрации пирувата в растворах.

Стадия 2. Построение калибровочного графика для определения лактата.
Составляется ряд стандартных растворов лактата (включая контроль – С=0).
Строится график зависимости оптической плотности растворов от концентрации лактата в растворах.

Стадия 3. Определение количества пирувата в тканях почки колориметрическим методом с 2,4-динитрофенилгидразином (по Умбрайту).
Принцип метода состоит в том, что пируват взаимодействует в кислой среде с
2,4-динитрофенилгидразином. Образующийся в результате реакции 2,4- динитрофенилгидразид пировиноградной кислоты в отличие от гидразидов других кетокислот хорошо растворим в толуоле, при помощи которого его экстрагируют из реакционной смеси и создают щелочную среду, в которой он приобретает коричнево-красную окраску. Определение проводят колориметрически.

Стадия 4. Определение количества лактата в тканях почки методом с использованием п-оксидифенила (по Баркеру и Саммерсону). Принцип метода.
Молочная кислота кипячением с конц. серной кислотой превращается в ацетальдегид, который при конденсации с п-оксидифенилом образует 1,1-ди-
(оксидифенил)-этан. Этот продукт конденсации в растворе серной кислоты окисляется в продукт фиолетового цвета. Серная кислота действует здесь как конденсирующий агент и окислитель. Интенсивность окраски пропорциональна количеству ацетальдегида, а, следовательно, и количеству лактата. Метод позволяет определять лактат в количествах от 0,03 до 0,2 мкмоль (2,7 – 18,0 мкг) в пробе.

2.2. Результаты и их обсуждение

При проведении эксперимента были получены следующие результаты
(табл.2):

Табл.2 Содержание метаболитов в тканях почки в мг%.
|Метаболит |Содержание метаболита |
| |экспериментальное |литературное |
|глюкоза |27,9(1,6 |54(6 [7] |
|гликоген |48,1(2,2 |50,4(3,5 [8] |
|лактат |35,95 |32,4(1,8 [9] |
|пируват |1,93(0,19 |2,64(0,1 [10] |