-1-

СОВРЕМЕННЫЕ ДАННЫЕ О ГЕПАРИНЕ И

ЕГО БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

Гепарин - чрезвычайно важное соединение , синтезируемое в организме животных и человека . Это биологически активное вещество , антикоагулянт широкого спектра действия , регулятор многих биохимических и физиологических процессов , протекающих в животном организме , в настоящее время приковывает к себе пристальное внимание биологов , физиологов , фармакологов и клиницистов . Весьма эффективное использование гепарина в клинической практике выдвигает этот препарат в число перспективных фармакологических агентов .

ХИМИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ГЕПАРИНА
В исследованиях структуры гепарина большое значение имеет изучение типа гликозидной связи , определение содержания серы и сульфамидных карбоксиль- ных и других групп , количества ветвей в молекуле , а также выяснение природы уроновокислого компонента и т.д. Изучение молекулярной структуры гепарина очень важно , во-первых , с точки зрения сопоставления химической структуры этого вещества и его антикоагулянтных и других физиологических свойств , например , таких, как способность образовывать комплексы со многими веществами. Здесь можно указать на большую роль комплексных соединений гепарина с рядом тромбогенных белков плазмы крови и некоторыми биогенными аминами в регуляции жидкого состояния крови . Во-вторых , детальное выяснение структуры гепарина открывает определенные перспективы на пути исскуственного синтеза этогонезаменимого медикамента . По химическому строению гепарин представляет собой высокосульфированный мукополи- сахарид , состоящий из последовательно чередующихся остатков -D-
- глюкороновой кислоты и 2-амино-2-дезокси - - D - глюкозы , соединенных связями 1—4 . Основная связь в гепарине — это 1—6 гекзоамин . Вольфром и соавторы (Wolfrom et al.,1966) обнаружили , что конфигурация 2-амино-2- дезокси--D - глюкороновокислотной связи представляет собой -D-связь.
Наряду с этим отмечается существование и некоторой - конфигурации. В молекуле гепарина на тетрасахаратную единицу приходится по 5—6, 5 сульфатных групп . Остатки серной кислоты присоединены к ОН-группам глюкозамина . Высокое содержание сульфогрупп обусловливает значительный от рицательный заряд и , следовательно , большую подвижность в электрическом поле . Около 10% аминогрупп гепарина находится в свободном состоянии . Большинство же из них сульфатированны.
Сульфокислотные группы, вероятно, присоединены к аминогруппам с обра- зованием аминосульфокислоты.

Молекулу гепарина принято рассматривать как протяженную, неразветв- леннуюлинейную структуру. Так, электронно-микроскопические исследования показали, что длина молекулы гепарина равна 160=40 А . Наряду с этим некоторые авторы высказываются в пользу разветвленной структуры.

По данным Вольфрома и Вэнга, гидроксильная группа с-6 2-амино-2- де- зокси-D-глюкозной единицы гепарина сульфатированы. Видимо, в указанной выше единице гепарина существуют две сульфатные группы.
Причем остаток D-глюкуроновой кислоты не сультирован. Денишефски и соавторы считают, что в гепарине сульфатировано по атому углерода в положении 2 1/3 глюкуроновокислотного компонента и большая часть глю- козаминов сульфатирована по атому углерода в положении 6.

До сих пор окончательно не решен вопрос о том,содержит ли гепарин ацетильные группы. В то же время при исследовании бычьего, свиного и китового гепарина установлено, что химическое строение и распреднление остатков N-ацетилглюкозамина одинаково во всех препаратах.

Изучение структуры гепарина методом ЯМР показало,что гексуроновые остатки находятся в молекуле в конформации С-1.

В содержании и составе гексуроновых кислот в гепаринах и гепарино- вых фракциях различных млекопитающих обнаружены значительные раз- личия. D-глюкуроновая кислота - основная уроновая кислота, входящая в состав гепарина. В гепарине также отмечено наличие кетуроновой и L-

идуроновой кислот и найдено, что их соотношение равно 2,6 1. Для ге- парина характерно присутствие относительно большого количества ( до
1/3) L- идопираносилуровых остатков. Определение уровня уроновых кис- лот ( идуроновой и D- глюкуроновой), входящих в различные гепарины и гепарансульфаты, показало, что содержание идуроновой кислоты не зависит от источника гепарина или гепарансульфатов и составляет соот- ветственно 50-90 и 30-55 %. В исследуемых мукополисахаридах увеличивалась величина соотношения N- к О- сульфатам по мере возрастания в них уровня идуроновой кислоты. Величины отношений N- сульфата к глюкозамину в гепарине и гепарансульфатах составляют 0,7-

1,0 и 0,3- 0,6. Отношение S- сульфата к глюкозамину изменяется в пределах 0,9- 1,5 для гепарина и 0,2- 0,8 для гепарансульфата.
Видимо, это свидетельствует в пользу того, что гепарансульфаты представляют собой предшественники гепарина при его биосинтезе.

Изучение продуктов деградации гепарина под действием ферментов, выделяемых из среды бактерий Flavobacterium heparinum, позволило сде-

лать вывод, что его молекула состоит из ряда последовательно распо-

ложенных стуктурных элементов, которые могут быть представлены как
1 - 4 связанные биозные остатки 2- сульфата 4-О-( (- L- идопираносульфу- роновой кислоты) и 2-( дезокси- 2 - сульфамино-(-D- глюкопираносил-6- сульфата). Повторяющиеся тетрасахаридные единицы, включающие в себя два уроновых и идуроновых остатка,-такова структура молекулы ге- парина по представлениям Хелтинг и Линдал.

Данные о способе связей между повторяющимися единицами гепарина весьма разноречивы. По ширине рентгеновских отражений установлено, что молекула гепарина содержит 10 тетрасахаридных поаторяющихся еди- ниц.

При выделении гепарина из печени быка были получены три фракции, две из которых гомогенны. Биологическая активность этих фракций росла пропорционально молекулярному весу. Так, максимальная активность бы- ла у фракции с молекулярным весом 16200, а минимальная - у фракции
7600. Установлено, что во фракциях с молекулярными весами 16200 и
15500 белковых примесей больше, чем во фракции 7600. Во всех фрак-

циях был обнаружен глюкозамин, галактозамин, гексуронат, сульфат, га-

лактоза и ксилоза в разных количествах. Некоторые незначительные отличия,наблюдаемые в структуре гепарина , видимо объясняются тем , что исследуемые препараты получены из различных тканевых источников и мо- гут быть обусловлены стабильными комплексами гепарина с белками , а также наличием примесей . По разным данным , молекулярный вес гепарина составляет от 4800 до 20000 . Метод низкого угла рассеяния Х-лучей дает значение молекулярного веса в 12900 , что хорошо согласуется с результата- ми , полученными с помощью равновесной седиментации и внутренней вяз- кости : 12500 и 12600 соответственно . Методом гельфильтрации на сефа- дексе G-200 показано, что молекулярные веса гепарина , полученного из мукозы собаки и быка , а также из легких быка , равны 11000 - 12000 .

Как известно в ряду моносахарид ( олигосахарид ( полисахарид ИК-
- спектры поглощения упрощаются в связи с перекрыванием многих полос .
И хотя в настоящее время интерпретация ИК-спектров ВМС подобной слож- ной структуры крайне затруднена и точный метод анализа еще не разработан, полученный А.М.Ульяновым и др. ИК-спектр гепарина фирмы “СПОФА” (ЧССР) позволил идентифицировать наличие максимумов поглощения , соответствую- щих валентным колебаниям следующих групп : SO(N ,SO3 ,COO-, а также груп- пировки С—С , ОН - и ряд других , присущих структуре молекулы гепарина .

В спектре поглощения гепарина в УФ-области области слабый максимум при
267 нм . возможно это обусловлено незначительными примесями белка или аминокислот . Так , А.Ф.Алекперов (1972) пришел к выводу , что чистые образцы гепарина не дают полос поглощения в УФ-области спектра . Однако при исследовании водных растворов ряда коммерческих препаратов гепарина удалось выявить максимум поглощения при 258 нм . Автор отмечает ,что ука- занную полосу поглощения дает фенилаланин . С помощью фотометрии и хроматографии на бумаге показано , что в препаратах гепарина в небольших количествах присутствует белок : минимум в гепарине фирм “ПОЛЬФА” и
“РИХТЕР” (0,0026 и 0,0035 г) и максимум в гепарине фирмы “СПОФА “ и Бакин- ского завода (0,0045 и 0,006 г ). Алекперов отмечает ,что полученные данные

могут служить критерием чистоты этих препаратов .

Седиментационный анализ гепарина дал коэффициент седиментации для
1% - ного водного раствора фирмы “СПОФА” 2,65 S.

Описаны различия в биологической активности между L- и (- гепаринами .
Это обусловлено тем , что у L-гепарина глюкозамин присоединен L-гликозид- ной связью , (-гепарин имеет в своем составе галактозамин , соединенный
(-гликозидной связью . (-гепарин , имеющий в своем составе более низкое содержание серы и меньший молекулярный вес ,чем L- гепарин , обладает и меньшей биологической активностью . По химической структуре он предста- вляет собой хондроитинсерную кислоту с ацилированной аминогруппой и со- держит галактозамин вместо глюкозамина .

ЗАВИСИМОСТЬ МЕЖДУ СТРУКТУРОЙ ГЕПАРИНА И